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RCM 超高分辨多重扫描共聚焦显微镜

多重扫描共聚焦技术,光学分辨率达到170nm,去卷积后120nm

信噪比提升4倍,增加系统灵敏度

样本平面的激光强度仅有纳瓦等级,适合做长时间活细胞成像

搭配普通显微镜,轻松升级成共聚焦显微镜


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产品原理

        由于光学衍射的限制,标准激光扫描共聚焦显微镜的光学分辨率是240nm,而且价格昂贵。荷兰Confocal.nl的RCM(超高分辨多重扫描共聚焦显微镜)可安装在普通荧光显微镜的port上,利用RCM技术(Re-scan Confocal Microscopy,重扫共聚焦显微技术)为原显微镜增加一个共聚焦光路,得到超高分辨共聚焦图像(光学分辨率达到170nm,去卷积后达到120nm),图像更锐利,细节更明显。RCM还增加了灵敏度,信噪比是原来的4倍。样本平面激光强度仅nano-watt水平,可显著降低光毒性和光漂白性,适合长时间活细胞共聚焦成像。它在提升分辨率和灵敏度的同时,也可改进原显微镜的z-stack 3D切片功能,适合做3D共聚焦成像。


重扫共聚焦显微技术原理图:


重扫描原理图.png


可兼容的显微镜型号(以下为推荐型号,具体型号可咨询):


兼容的显微镜类型.png


产品特点

1.   结构特点:采用数字扫描技术,双向扫描,提高成像速度;搭配较大的光学元件,适合更高NA值的40X至100X的物镜,可得到宽阔的视野和明亮的图像。

2.   更好的信噪比:信噪比提升4倍,增加系统灵敏度。

3.   更高的灵敏度:微弱荧光强度的图像也可获取。

4.   更高的横向分辨率:分辨率提升1.4倍,重扫后达到超分辨率170nm,重扫+去卷积可达到120nm。图像更锐利,细节更明显。

5.   激光强度弱:样本平面的激光仅有nano-watt等级,光毒性和光漂白性极弱,适合做长时间活细胞成像。

6.   可做长时间活细胞成像:高分辨率、高灵敏度,且激光强度弱,长时间成像对细胞伤害小。

7.   扫描速度:图像大小为512x512像素时为2 fps(每秒2帧),一般扫描为5 fps(每秒5帧),最快可达到10 fps(每秒10帧)。

8.   改进3D切片成像功能:可用于多层扫描及3D影像构建。

9.   多达4个荧光通道:激发光分别为:405nm、488nm、561nm、640nm。

10.  无需图像后处理:为光路设计,在成像时即提供更高的分辨率和灵敏度,无需进行图像后处理,节省时间。

11.  用户友好型操作模式:短时间培训即可操作。

12.  开放型系统设计:升级您目前已有的显微镜,兼容多类图像处理软件。

13.  灵活的配置:可选择不同生产商的显微镜、相机和激光光源进行配置。

14.  性价比高:改造成本低廉,可利用您已有的显微镜和配件进行改造。


宽场成像和RCM成像的对比:


宽场和RCM的对比-2.png


广泛的应用领域

适合同时要求高分辨率和高灵敏度的生物学应用,尤其适合低荧光强度的图像的获取,如单分子荧光原位杂交检测(smFISH);可做类器官、斑马鱼胚胎、或更大的活性样本的深度3D成像和长时间活细胞成像。


应用展示

1、具有超越普通共聚焦显微镜的分辨率

鹿皮肤成纤维细胞样本:从左到右分别是:大视野图片、放大的宽场图片、传统共聚焦图片、RCM技术处理的图片、Deconvolution(去卷积)处理的图片。可见RCM和“去卷积”技术都可以得到比传统共聚焦技术更好的分辨率和灵敏度。


成像效果对比图.png

2、2D细胞RCM成像

染色的共培养的神经元细胞:40x物镜(NA 1.4),红色:肌动蛋白(Actin)、品红色:MAP2、绿色:Tau,RCM2成像。


染色的共培养的神经元细胞.jpg


染色的果蝇心脏微管:40x物镜(NA 1.4),绿色:肌动蛋白(Actin)、红色:肌球蛋白重链、蓝色:微管蛋白(Alpha-tubulin),RCM2成像。


染色的果蝇心脏微管.jpg


染色的HUVECs细胞:黄色:微管蛋白(Tubulin)、紫色:肌动蛋白(Actin)、蓝色:DNA,RCM2成像。


染色的HUVECs细胞.jpg


染色的BPAE细胞:40x物镜(NA 1.4),绿色:肌动蛋白(Actin)、红色:线粒体(Mitochondria)、蓝色:DNA,RCM2成像。


染色的BPAE细胞.jpg


3、3D影像重建RCM成像

三维影像重建:处在有丝分裂过程中的Hela细胞。绿色:细胞骨架肌动蛋白(Actin);红色:微管蛋白(Tubulin);蓝色:细胞核,RCM1成像。



三维影像重建:观察老鼠囊胚里胚层细胞分布的状况,可以看到囊胚内部是中空的。绿色:原始内胚层marker:GATA4;红色:滋养外胚层marker:CDX2;蓝色:细胞核,RCM1成像。



三维影像重建:观察肿瘤球。蓝色:细胞核,RCM成像,去卷积处理。


4、长时间活细胞RCM成像

活细胞线粒体动态观察:10秒拍1张,拍摄了61hr6min,共22000张,最后观察到细胞还是存活的,还在分裂,说明激光对活细胞的毒性很小、伤害很小。


Video

三维影像重建:处在有丝分裂过程中的Hela细胞。绿色:细胞骨架肌动蛋白(Actin);红色:微管蛋白(Tubulin);蓝色:细胞核,RCM1成像。
三维影像重建:观察老鼠囊胚里胚层细胞分布的状况,可以看到囊胚内部是中空的。绿色:原始内胚层marker:GATA4;红色:滋养外胚层marker:CDX2;蓝色:细胞核,RCM1成像。
三维影像重建:观察肿瘤球。蓝色:细胞核,RCM成像,去卷积处理。
长时间活细胞线粒体动态观察。10秒拍1张,拍摄了61hr6min,共22000张,最后观测到细胞还是存活的,还在分裂,说明激光对活细胞的毒性很小、伤害很小。

处在有丝分裂过程中的Hela细胞三维影像

老鼠囊胚里胚层细胞分布的三维影像

肿瘤球三维影像

长时间活细胞线粒体动态观察

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