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NL5 快速深度3D共聚焦显微镜

利用狭缝针孔建立共聚焦成像光路

扫描速度快,避免了光漂白性和光毒性

适合深度成像,无针孔串扰现象

搭配普通显微镜,轻松升级成共聚焦显微镜


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产品原理

        荷兰Confocal.nl的NL5(快速深度3D共聚焦显微镜)可安装在普通荧光显微镜的port上,为原显微镜增加一个共聚焦光路,与普通的点扫描共聚焦不同的是:NL5利用狭缝针孔(slit pinhole)而不是普通针孔(pinhole)建立共聚焦成像光路,狭缝的引入可以增强信号强度,它的激发光成“棒”状(bar)快速扫描样本,在检测器阵列的作用下可以实时线性成像(real time line imaging),可以极高速地进行深度3D共聚焦成像。NL5整合了狭缝针孔(slit pinhole)、前沿的数字化技术和采用极高灵敏度的sCMOS相机做检测器,成为了可以做快速、深度3D活细胞成像的共聚焦显微镜系统。

 

        常用的点扫描共聚焦速度有限,NL5利用狭缝针孔(slit pinhole)用线性扫描代替传统的点扫描达到极快的扫描速度:25fps,full frame。这样您的样本就不会在激光下暴露太长时间,避免了光漂白和光毒性。另外,高量子效率的现代化sCMOS相机的使用也使极低激光强度成为可能,因此可以得到在无光毒性和光漂白性的情况下得到高信噪比的图像,特别适合3D活细胞长时间成像,在给样本提供温和的生长环境的同时,得到高分辨率和高对比度的3D图像。

 

        对比转盘式共聚焦系统,NL5的另外的优势是:它的狭缝针孔(slit pinhole)使之在进行深度成像时不会引起针孔串扰(pinhole cross-talk)现象(转盘式共聚焦具有多个针孔,离焦平面足够远的杂散光会进入相邻的针孔,这一过程称为针孔串扰,样品越厚串扰影响越大)。NL5具有较高的分辨率:可以得到240nm的光学横向分辨率,实时去卷积后可以达到170nm。和RCM(超高分辨多重扫描共聚焦显微镜)一样,NL5可以搭配不同生产商的显微镜、相机和激光光源,将普通宽场荧光显微镜改造成快速深度3D共聚焦显微镜,还可以和RCM一起同时安装在普通荧光显微镜上,即使整套采购也具有极高的性价比。


产品特点

NL5的含义即:New Line、New Light、New Live,它具有以下特点:

1.   具有单一的数字扫描头;

2.   适合做快速深度3D活细胞成像;

3.   在深度3D成像领域,比转盘式共聚焦的分辨率更高;

4.   成像亮度是转盘式共聚焦的16倍;

5.   没有转盘式共聚焦的针孔串扰(pinhole cross-talk)现象;

6.   实时成像分辨率达到170nm(去卷积后);

7.   更大的FOV:12.7×12.7mm;

8.   具有极快的扫描成像速度:25fps(每秒25帧),2048×2048;

9.   灵敏度极高,量子效率(QE)达到95%;

10.  狭缝针孔选择:50mu:1.2AU@100×或20mu:1.2AU@40×;

11.  低光毒性和光漂白性,适合长时间成像;

12.  电动Bypass模式,可快速在宽场荧光显微镜和NL5之间切换;

13.  紧凑的设计,易于使用;

14.  开放型系统设计:升级您目前已有的显微镜,兼容多类图像处理软件;

15.  灵活的配置:可选择不同生产商的显微镜、相机和激光光源进行配置;

16.  性价比高:改造成本低廉,可利用您已有的显微镜和配件进行改造。


广泛的应用

1、 成像速度快,可研究快速的细胞动态变化,光毒性极弱。应用如:细胞迁移、细胞内/外的传输、细胞信号等。

2、 长时间活细胞成像,光毒性和光漂白性均极弱。应用如:发育生物学、再生生物学、免疫学等。

3、 深度3D成像,NL5适合长时间观察大型的活体组织,而不会遗漏任何细节。应用如:类器官、斑马鱼/小鼠胚胎、水凝胶的3D结构成像,等。

4、 多色高内涵药物筛选:可以快速扫描96孔板,并快速确定感兴趣的孔。


应用展示

1、快速细胞动态变化的NL5成像

NL5成像速度快,可研究快速的细胞动态变化,光毒性极弱。在生物学领域,一些生物过程发生的非常迅速,如细胞-蛋白动态作用、细胞-细胞相互作用,所以需要快速的扫描速度。应用如:细胞迁移、细胞内/外的传输、细胞信号等。即使信号微弱,也可以对动态的结构进行成像分析。


Hela细胞的快速3D成像:胞质GFP,动态录像显示其结构快速运动。



2、小鼠肠道肿瘤类器官NL5成像

小鼠肠道肿瘤类器官长时间成像


3、长时间活细胞NL5成像

NL5可做长时间活细胞成像,光毒性和光漂白性均极弱。应用如:发育生物学、再生生物学、免疫学等,可以进行长达1天多的共聚焦成像,而不产生光毒性。

 

斑马鱼胚胎长时间成像:脉管系统的形成(24hr),内皮细胞标记内源性GFP。



斑马鱼胚胎长时间成像-2.png

4、深度三维NL5成像

NL5可做深度3D成像,适合长时间观察大型的活体组织,而不会遗漏任何细节。应用如:类器官、斑马鱼/小鼠胚胎、水凝胶的3D结构成像,等。

 

NL5、NL5去卷积和转盘式共聚焦(SDC)在不同深度的3D成像上的对比:样本:团藻,自发荧光,激发光561nm,物镜:100x,NA1.45,油镜。


深度3D成像.jpg


NL5和转盘式共聚焦在3D成像上的对比(深度60μm),NL5图像更明亮、更清晰。样本:团藻,自发荧光,激发光561nm,物镜:100x,NA1.45,油镜。


深度3D成像-60um.jpg


NL5和转盘式共聚焦在3D成像上的对比(深度90μm),NL5图像更明亮、更清晰。样本:团藻,自发荧光,激发光561nm,物镜:100x,NA1.45,油镜。


深度3D成像-90um.jpg


NL5在90μm深度处的成像:


Volvox Globator autofluorescence 90um depth.jpg


5、去卷积NL5成像

NL5原始图像和NL5去卷积图像相对比,去卷积后图像分辨率更高,细节更锐利。


NL5原始图像和NL5去卷积图像相对比.png

Video

Hela细胞的快速3D成像:胞质GFP,动态录像显示其结构快速运动。
小鼠肠道肿瘤类器官长时间成像
斑马鱼胚胎长时间成像:脉管系统的形成(24hr),内皮细胞标记内源性GFP。
HUVEC细胞成像

Hela细胞的快速3D成像

小鼠肠道肿瘤类器官长时间成像

斑马鱼胚胎长时间成像

HUVEC细胞成像

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